1 儀器與試藥
Agilent氣相色譜儀 。L － 阿拉伯糖醇( CAT． NO． 1042102 USP ROCKVILLE，MD LOT FOE311; 純度: 100%) ，半乳糖醇( CAT． NO． 1287711 USP ROCKVILLE，MD LOT F0D376;純度: 99%) ，甘露醇(純度:99. 6%)和山梨醇( CAT． NO． 1617000 USP ROCKVILLE，MD LOT H2F247; 純度: 98. 7%) 。木糖醇氯化鈉注射液樣品9批均由廠家提供，: 10050601， 10050602， 10050603，10050604， 10050605， 10050606， 10050607，10050608，10050609。
2 溶液的配制
2. 1 對照品溶液
分別精密稱取L － 阿拉伯糖醇，半乳糖醇，甘露醇和山梨醇10 mg，置100 mL 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，再精密量取5 mL 置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度。
2. 2 內(nèi)標溶液
以赤藻糖醇作為內(nèi)標物質，精密稱取赤藻糖醇( CAT． NO． 1241903 USP ROCKVILLE，MD LOT F1F295; 純度: 99. 9%) 35 mg，置10mL 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。再精密量取1. 5 mL 置100 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度。
2. 3 供試品溶液
配制成10 mg·mL － 1 的樣品溶液。精密量取5 mL 置25 mL 量瓶中( 規(guī)格為12. 5 g:250 mL) ，加水稀釋至刻度。
2. 4 測定法
分別精密量取對照品溶液和供試品溶液1. 0 mL 置不同圓底燒瓶中，每個圓底燒瓶中再分別精密加入內(nèi)標溶液1. 0 mL。在60℃水浴中旋轉蒸干; 再加入無水乙醇1 mL，振搖使溶解，在60℃水浴中旋轉蒸干; 再加入吡啶1 mL 使殘渣溶解，加入醋酐1 mL，蓋緊蓋子，渦旋混合30 s; 70℃干燥箱中放置30 min。取出，放冷，精密量取1μL 進樣。
3 色譜條件
色譜柱固定相為14%氰丙基苯基－ 94%二甲基聚硅氧烷的DB － 1701 毛細管柱( 30 m × 0. 32 mm ×0. 25μm) ; 檢測器FID，檢測器溫度250℃; 柱溫采用程序升溫，起始溫度為170℃，維持5 min，以每分鐘3℃的速率升至210℃，維持10 min，以每分鐘30℃的速率升至240℃，維持10 min; 進樣口溫度為240℃; 載氣: N2; 流速2 mL·min －1; 分流比5∶ 1; 進樣量: 1 μL。各色譜峰的分離度應大于1. 5。赤藻糖醇，L － 阿拉伯糖醇，木糖醇，甘露醇，半乳糖醇和山梨醇的相對保留時間依次為: 0. 33， 0. 63， 0. 94， 0. 98， 1. 0。記錄色譜圖，按內(nèi)標法計算。在上述色譜條件下，對照品和樣品的色譜圖見圖1。
4 方法學考察
4. 1 精密度試驗
分別精密量取對照品溶液1. 0 mL和內(nèi)標溶液1. 0 mL 置同一圓底燒瓶中，其它操作同“2. 4”項。連續(xù)進樣6 針，計算L － 阿拉伯糖醇，木糖醇，甘露醇，半乳糖醇和山梨醇的RSD( A對照/A內(nèi)標) 分別為0. 4%， 0. 7%， 1. 3%， 1. 6%， 1. 2%。4. 2 線性考察分別精密吸取L － 阿拉伯糖醇，甘露醇，半乳糖醇和山梨醇各3，2，1， 0. 8， 0. 5mL 置圓底燒瓶中，在每個燒瓶中加入內(nèi)標溶液1 mL，以峰面積A 為縱坐標，以樣品濃度C( mg·mL － 1 ) 為橫坐標分別繪制標準曲線，L － 阿拉伯糖醇、甘露醇、半乳糖醇、山梨醇的線性方程分別為:
A = 335. 859C + 0. 0039 r = 0. 9998;
A = 336. 532C + 0. 0339 r = 0. 9998;
A = 37. 728C － 0. 0453 r = 0. 9999;
A = 36. 416C － 0. 001 r = 0. 9991
結果表明L － 阿拉伯糖醇在0. 01278 ～0. 07672 mg·mL － 1 ，甘露醇在0. 0123 ～0. 0738 mg · mL － 1，半乳糖醇在0. 01492 ～0. 08955 mg · mL － 1 ，山梨醇在0. 01336 ～0. 08015 mg·mL － 1 范圍內(nèi)具有良好的線性關系。
4. 3 檢出限和定量限
當信噪比S /N = 10 時，L －阿拉伯糖醇，甘露醇，半乳糖醇和山梨醇的定量限分別為2. 56， 2. 46， 2. 98 和2. 67 μg; 按信噪比S /N = 3計算，zui低檢出量依次為0. 78，0. 74，0. 89 和0. 80 μg。4. 4 穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8， 12， 24 h按上述色譜條件測定，結果表明，供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。
4. 5 重復性試驗分別精密量取對照品溶液
1. 0 mL和內(nèi)標溶液1. 0 mL 置同一圓底燒瓶中，平行制備6 份，其它操作同“2. 4”項。在上述色譜條件下記錄各色譜峰峰面積，計算L － 阿拉伯糖醇，半乳糖醇，甘露醇和山梨醇峰面積的RSD ( A對照/A內(nèi)標) 依次為0. 2%，0. 5%，0. 8%，1. 2%，1. 2%。
說明衍生化反應的重復性良好。將同一批木糖醇氯化鈉注射液( 批號10050606) 按上述方法制備6 份，在上述色譜條件下分析，計算L － 阿拉伯糖醇，半乳糖醇，甘露醇和山梨醇含量的平均值分別為0. 04%，0，0，0; RSD 分別為0. 1%，0，0，0
。
4. 6 回收率
精密量取木糖醇氯化鈉注射液( 批號10050606) 5 mL 置25 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL置一圓底燒瓶中，再分別加入對照品溶液和內(nèi)標溶液1，0. 8，0. 5 mL，其它操作同“2. 4”項。計算L － 阿拉伯糖醇，半乳糖醇，甘露醇和山梨醇的回收率，見表1。
5 樣品的測定
對9 批樣品，按“2”項下方法制備對照品溶液、內(nèi)標溶液和供試品溶液，依法測定，結果見表2。
6 討論
6. 1 色譜條件的考察
本研究考察了DB － 1701，DB － 624，HP － 5 3 根不同型號的石英毛細管柱，結果表明DB － 1701 石英毛細管柱能夠將待測組分實現(xiàn)良好的分離。本試驗曾嘗試以起始溫度為100℃，發(fā)現(xiàn)赤藻糖醇峰無法與溶劑峰分開。若每分鐘3℃的速率升至215℃，維持10 min，結果發(fā)現(xiàn)甘露醇，半乳糖醇和山梨醇無法*分離。改用起始溫度為170℃，維持5 min，以每分鐘3℃的速率升至210℃，維持10 min，以每分鐘30℃的速率升至240℃，維持10 min 后，各待測組分分離良好。
6. 2 提取條件的考察
本研究開始未用無水乙醇對樣品進行旋轉蒸干，發(fā)現(xiàn)色譜峰拖尾嚴重，故樣品處理分為三步: 在60℃水浴中將水旋轉蒸干; 加無水乙醇后在60℃水浴中將水再次旋轉蒸干; 加吡啶溶解后，再加入醋酐使醇衍生化。試驗發(fā)現(xiàn)隨著醋酐加入量( 0. 1 mL ～ 1. 0 mL) 的增大，各色譜峰的峰面積增大，但醋酐量大于1. 0 mL 后，色譜峰峰面積不再增大，結果見表3。說明已衍生化*，衍生化率幾近100%，故醋酐加入量為1. 0 mL。
6. 3 小結
本研究對9 批樣品，采用GC 法同時對L － 阿拉伯糖醇，甘露醇，半乳糖醇和山梨醇進行了含量測定，結果表明該方法簡單，準確，可靠，可更好控制該制劑的質量。
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